摘要：生物安全柜 生物安全柜是一種在微生物學(xué)、生物醫學(xué)、基因重組、動(dòng)物實(shí)驗、生物制品等領(lǐng)域的科研、教學(xué)、臨床檢驗和生產(chǎn)中廣泛使用的安全設備，也是實(shí)驗室生物安全中一級防護屏障中最基本的安全防護設

生物安全柜

生物安全柜是一種在微生物學(xué)、生物醫學(xué)、基因重組、動(dòng)物實(shí)驗、生物制品等領(lǐng)域的科研、教學(xué)、臨床檢驗和生產(chǎn)中廣泛使用的安全設備， 也是實(shí)驗室生物安全中一級防護屏障中最基本的安全防護設備。

在2003 年 SARS 暴發(fā)流行和高致病性禽流感發(fā)生后，特別是 2003 ～ 2004 年三起實(shí)驗室SARS 感染事故的發(fā)生，使政府、廣大科研工作人員對生物危害有了較為深刻的認識。2004 年，國家發(fā)布了國務(wù)院 424 號令《病原微生物實(shí)驗室過(guò)濾條例》和國家標準《實(shí)驗室—— 生物安全通用要求》 GB19489 —2004，明確指出生物安全柜作為一種微生物實(shí)驗室的主要安全設備，對保護實(shí)驗室工作人員是必不可少的。規范化、 標準化地使用生物安全柜，能對人員、環(huán)境、受試樣品提供保護。已經(jīng)研制的生物安全柜分為三類(lèi)：Ⅰ級柜、Ⅱ級柜和Ⅲ級柜，它們能滿(mǎn)足各方面的實(shí)驗和臨床需要。

生物安全柜的功能、用途、結構、排氣系統和/或供氣系統（高效粒子空氣濾器），以及實(shí)驗室選擇生物安全柜的基本原則、安裝原則和要求、實(shí)驗室操作程序、日常維護要求等內容。這些內容是實(shí)際使用和操作生物安全柜時(shí)必須掌握的知識。

大多數實(shí)驗室工作人員對生物安全柜的性能、選擇、操作和維護等方面的知識非常缺乏，常?；煜锇踩衽c超凈工作臺這兩種設備。其實(shí)兩者之間是有本質(zhì)區別的，生物安全柜是一種負壓的凈化工作臺，正確操作生物安全柜，能夠完全保護工作人員、受試樣品并防止交叉污染的發(fā)生；而超凈工作臺只是保護操作對象而不保護工作人員和實(shí)驗室環(huán)境的潔凈工作臺。因此，在微生物學(xué)和生物醫學(xué)的科研、教學(xué)、臨床檢驗和生產(chǎn)中，應該選擇和使用生物安全柜，而不能夠選擇和使用超凈工作臺。

生物安全柜設計、生產(chǎn)和檢測驗證中使用的各種術(shù)語(yǔ)和定義、 分類(lèi)、設計、結構和性能的基本要求、試驗方法、檢驗規則、標志、標簽和說(shuō)明書(shū)、包裝、運輸和貯存的要求、檢測驗證方法、檢測儀器的選擇和校準、產(chǎn)品出廠(chǎng)檢驗要求、現場(chǎng)檢驗要求等。

生物安全柜的選擇生物安全柜（ Biological safety cabinets,BSCs ）是為操作原代培養物、菌毒株以及診斷性標本等具有感染性的實(shí)驗材料時(shí)， 用來(lái)保護操作者本人、 實(shí)驗室環(huán)境以及實(shí)驗材料，使其避免暴露于上述操作過(guò)程中可能產(chǎn)生的感染性氣溶膠和濺出物而設計的。

WHO 《實(shí)驗室生物安全手冊》提出，生物安全柜可以有效減少由于氣溶膠暴露所造成的實(shí)驗室感染以及培養物交叉污染。生物安全柜同時(shí)也能保護工作環(huán)境。

事實(shí)上， 生物安全柜更側重于保護操作人員和環(huán)境， 防止操作的病原微生物擴散造成人員傷害和環(huán)境污染。

根據生物安全防護水平的差異，生物安全柜可分為一級、二級和三級三種類(lèi)型。一級生物安全柜可保護工作人員和環(huán)境而不保護樣品。其氣流原理和實(shí)驗室通風(fēng)櫥基本相同，不同之處在于排氣口安裝有 HEPA 過(guò)濾器，將外排氣流過(guò)濾進(jìn)而防止微生物氣溶膠擴散造成污染。一級生物安全柜本身無(wú)風(fēng)機，依賴(lài)外接通風(fēng)管中的風(fēng)機帶動(dòng)氣流，由于不能保護柜內產(chǎn)品，目前已較少使用。

二級生物安全柜是目前應用最為廣泛的柜型。按照《中華人民共和國醫藥行業(yè)標準YY0569-2005 生物安全柜》中的規定，二級生物安全柜依照入口氣流風(fēng)速、排氣方式和循環(huán)方式可分為 4個(gè)級別：A1 型，A2 型，B1 型 和 B2 型。所有的二級生物安全柜都可提供工作人員、環(huán)境和產(chǎn)品的保護。

A1 型安全柜前窗氣流速度最小量或測量平均值應至少為 0.38m/s。無(wú)內部循環(huán)氣流，100%的氣體通過(guò)排氣口過(guò)濾排出。

A2 型安全柜前窗氣流速度最小量或測量平均值應至少為 0.5m/s。70%氣體通過(guò) HEPA 過(guò) 濾器再循環(huán)至工作區， 30%的氣體通過(guò)排氣口過(guò)濾排出。

二級 B 型生物安全柜均為連接排氣系統的安全柜。連接安全柜排氣導管的風(fēng)機連接緊急供應電源， 目的在斷電下仍可保持安全柜負壓， 以免危險氣體泄漏入實(shí)驗室。其前窗氣流速度最小量或測量平均值應至少為 0.5m/s(100fpm) 。

B1 型 70%氣體通過(guò)排氣口 HEPA 過(guò)濾器排除， 30%的氣體通過(guò)供氣口 HEPA 過(guò)濾器再循環(huán)至工作區。

B2 型為 100% 全排型安全柜，無(wú)內部循環(huán)氣流，可同時(shí)提供生物性和化學(xué)性的安全控制，可以操作揮發(fā)性化學(xué)品和揮發(fā)性核放射物作為添加劑的微生物實(shí)驗。

三級生物安全柜是為生物安全防護等級為 4 級實(shí)驗室而設計的，柜體完全氣密，工作人員通過(guò)連接在柜體的手套進(jìn)行操作，俗稱(chēng)手套箱 (Golve box) ，試驗品通過(guò)雙門(mén)的傳遞箱進(jìn)出安全柜以確保不受污染，適用于高風(fēng)險的生物試驗，如進(jìn)行 SARS、埃博拉病毒相關(guān)實(shí)驗等。

根據生物安全柜的強制性行業(yè)標準《中華人民共和國醫藥行業(yè)標準 YY0569-2005 生物安全柜》規定，只有獲得國家食品藥品監督管理局頒發(fā)的三類(lèi)醫療器械注冊證的產(chǎn)品才能真正保護操作人員、實(shí)驗室環(huán)境和操作樣本。

超凈工作臺

超凈工作臺（LAMINAR FLOW CABINET）（Clean Benches），為了保護實(shí)驗材料而設計的，通過(guò)風(fēng)機將空氣吸入預過(guò)濾器，經(jīng)由靜壓箱進(jìn)入高效過(guò)濾器過(guò)濾，將過(guò)濾后的空氣以垂直或水平氣流的狀態(tài)送出，使操作區域達到百級潔凈度，保證生產(chǎn)對環(huán)境潔凈度的要求。

超凈工作臺只能保護樣品，不保護操作人員。

從潔凈級別看，生物安全柜也比超凈工作臺高級。

超凈臺的優(yōu)點(diǎn)是操作方便自如，比較舒適，工作效率高，預備時(shí)間短，開(kāi)機10分鐘以上即可操作，基本上可隨時(shí)使用。在工廠(chǎng)化生產(chǎn)中，接種工作量很大，需要經(jīng)常長(cháng)久地工作時(shí)，超凈臺是很理想的設備。

超凈臺由三相電機作鼓風(fēng)動(dòng)力，功率１４５～２６０Ｗ左右，將空氣通過(guò)由特制的微孔泡沫塑料片層疊合組成的“超級濾清器”后吹送出來(lái)，形成連續不斷的無(wú)塵無(wú)菌的超凈空氣層流，即所謂“高效的特殊空氣”，它除去了大于０．３ μｍ的塵埃、真菌和細菌孢子等等。超凈空氣的流速為２４～３０ｍ／ｍｉｎ，這已足夠防止附近空氣可能襲擾而引起的污染，這樣的流速也不會(huì )妨礙采用酒精燈、本生燈（Bunsen Burner）或電子火焰滅菌器對器械等的灼燒消毒。

工作人員就在這樣的無(wú)菌條件下操作，保證無(wú)菌材料在轉移接種過(guò)程中不受污染。但是萬(wàn)一操作中途遇到停電，暴露在未過(guò)濾空氣中的材料便難以避免污染。這時(shí)應迅速結束工作，并在瓶上作出記號，內中的材料如處于增殖階段，則以后不再用作增殖而轉入生根培養。如為一般性生產(chǎn)材料，因其極其豐富也可棄去。如處于生根過(guò)程，則可留待以后種植用。

超凈臺電源多采用三相四線(xiàn)制， 其中有一零線(xiàn)，連通機器外殼，應接牢在地線(xiàn)上， 另外三線(xiàn)都是相線(xiàn)， 工作電壓是３８０Ｖ。三線(xiàn)接入電路中有一定的順序， 如線(xiàn)頭接錯了，風(fēng)機會(huì )反轉，這時(shí)聲音正?；蛏圆徽?，超凈臺正面無(wú)風(fēng) 可用酒精燈火焰觀(guān)察動(dòng)靜，不宜久試 ，應及時(shí)切斷電源，只要將其中任何兩相的線(xiàn)頭交換一下位置再接上，就可解決。

三相線(xiàn)如只接入兩相， 或三相中有一相接觸不良，則機器聲音很不正常，應立即切斷電源仔細檢修，否則會(huì )燒毀電機。這些常識應在開(kāi)始使用超凈臺時(shí)就向工作人員講解清楚，免除不應造成的事故與損失。

超凈臺進(jìn)風(fēng)口在背面或正面的下方，金屬網(wǎng)罩內有一普通泡沫塑料片或無(wú)紡布，用以阻攔大顆粒塵埃，應常檢查、拆洗，如發(fā)現泡沫塑料老化，要及時(shí)更換。除進(jìn)風(fēng)口以外，如有漏氣孔隙，應當堵嚴，如貼膠布，塞棉花，貼膠水紙等。工作臺正面的金屬網(wǎng)罩內是超級濾清器， 超級濾清器也可更換，如因使用年久，塵粒堵塞，風(fēng)速減小，不能保證無(wú)菌操作時(shí)，則可換上新的。

超凈臺使用壽命的長(cháng)短與空氣的潔凈程度有關(guān)。在溫帶地區超凈臺可在一般實(shí)驗室使用，然而在熱帶或亞熱帶地區，由于大氣中含有高量的花粉，或多粉塵的地區，超凈臺則宜放在較好的有雙道門(mén)的室內使用。任何情況下都不應將超凈臺的進(jìn)風(fēng)罩對著(zhù)開(kāi)敞的門(mén)或窗，以免影響濾清器的使用壽命。

無(wú)菌室應定期用７０％酒精或０．５％苯酚噴霧降塵和消毒，用２％新潔爾滅抹拭臺面和用具７０％酒精也可，用福爾馬林４０％甲醛 加少量高錳酸鉀定期密閉熏蒸，配合紫 外線(xiàn)滅菌燈 每次開(kāi)啟１５分鐘以上等等消毒滅菌手段，以使無(wú)菌室經(jīng)常保持高度的無(wú)菌狀態(tài)。接種箱內部也應裝有紫外線(xiàn)燈，使用前開(kāi)燈１５分鐘以上照射滅菌，但凡是照射不到之處仍是有菌的。

在紫外線(xiàn)燈開(kāi)啟時(shí)間較長(cháng)時(shí)， 可激發(fā)空氣中的氧分子締合成臭氧分子，這種氣體成分有很強的殺菌作用，可以對紫外線(xiàn)沒(méi)有直接照到的角落產(chǎn)生滅菌效果。 由于臭氧有礙健康，在進(jìn)入操作之前應先關(guān)掉紫外線(xiàn)燈，關(guān)后十多分鐘即可入內。

在超凈工作臺上亦可吊裝紫外線(xiàn)燈，但應裝在照明燈罩之外，并錯開(kāi)照明燈平行排列，這樣在工作時(shí)不妨礙照明。若將紫外線(xiàn)燈裝入照明燈罩 玻璃板 里面，這是毫無(wú)用處的，因為 紫外線(xiàn)不能穿透玻璃，它的燈管是石英玻璃，而不是硅酸鹽玻璃制成的。

接種室內力求簡(jiǎn)潔， 凡與本室工作無(wú)直接關(guān)系的物品一律不能放入，以利保持無(wú)菌狀態(tài)。 接種室內的空氣與外界空氣應絕對隔絕，預留的通氣孔道應盡量密閉。通氣孔道可設上下氣窗，氣窗面積宜稍大，需覆上４層紗布作簡(jiǎn)單濾塵。在一天工作之后，可開(kāi)窗充分換氣，然后再予以密閉?？傊?，既要清潔無(wú)塵無(wú)菌，又要空氣新鮮，適宜工作。覆在通氣窗上的紗布應經(jīng)常換洗。但是上述種種措施只是理想的設計方案，往往不易全面做到，其實(shí)只要嚴格無(wú)菌操作手續，在門(mén)窗敞開(kāi)的室內，有超凈臺的保護，接種的污染率仍可控制在生產(chǎn)上可以容忍的水平。